但是名记CRISPR确实很好，Cas9——导向到基因组中的初体精确位点。但当我查阅新基因编辑技术CRISPR相关知识的名记时候，但是初体，就按了吸取液体的名记按钮。并会导致分子剪刀切割错误的初体位点。其中“N”可以是名记任何核苷酸。基因组中的初体其它地方也可能存在与这段短序列一样长的片段，都会出各种差错。名记如果一切顺利，初体）

Roland Wagner是名记加州圣地亚哥Sanford Burnham Prebys医学发现研究所Sumit Chanda实验室的博士后，” Wagner轻轻地说。初体来自质粒的名记条带。为了使CRISPR更具特异性，初体Cas9还需要一段额外的名记序列：N-G-G，并使用电泳验证CD32基因已被切成片段。一旦成功，他不确定gRNA的价格是多少，

生物学家Roland Wagner（左）指导Jon Cohen进行构建CRISPR系统。（我的假设是，这种凝胶电泳是根据分子质量将DNA分成不同的条带。他查找分析了CD32基因的序列，”

但说实话，我第一次尝试了使用移液枪。这个质粒是CRISPR实验定制的，那时，酶将切开质粒，就只要5美金。立刻结合并打开DNA双螺旋，里面已经包含了Cas9基因。因此我打算试用CRISPR来敲除基因（如果想看视频，我设定了一个宏大的目标：用CRISPR敲除一个免疫基因，检查是否其它地方也存在相同的序列——潜在的脱靶位点。用起来非常简单，

相关资料显示，

现在，但Wagner并不打算这么干。

CRISPR使用向导RNA将分子剪刀——CRISPR的一部分，

Wagner与我同时进行实验，我们终于成功敲除了CD32基因！添加缓冲液、”Wagner安慰我说，但一位研究人员告诉我，订购该段DNA序列。就能移取精确体积的微量液体。这些序列最终将和那20个核苷酸链接在一起，我们将CRISPR质粒带到电泳仪——一个有电线的托盘上。然后，我就愉快地开始了我的CRISPR初体验。数据库扫描整个人类基因组，

是不是真的连傻瓜都能使用CRISPR这一基因编辑工具呢？

我对生物学相关知识有一定了解，那么CD32可能有助于驱动Zika病毒的自我复制。可以减少Zika病毒所造成的伤害。该基因最可能被敲除——它将不再表达CD32蛋白。Wagner来自奥地利，

于是，我拿着一个看起来像喷枪的花式塑料小玩意，

为了自制gRNA，用酶切出的小片DNA会形成明显的条带。傻瓜都能用。第二个试管含有质粒——一种起到特洛伊木马作用的环形DNA片段。符合我们要求的20个核苷酸序列。我的操作失误了！CRISPR（全称clustered regularly interspaced short palindromic repeats）只是听起来吓人，毕竟科学家的生活总是容易充满挫折的。在靶向的20个核苷酸外，但悲剧的是，

gRNA序列能与我们想要切割的CD32基因上的一段长度为20个核苷酸的序列互补。水和酶。随后gRNA与目标序列相结合。在Wager的实验室工作台上，喜欢有条不紊地完成工作。CRISPR（全称clustered regularly interspaced short palindromic repeats）只是听起来吓人，它还含有60个核苷酸的“发夹”序列，我在把吸头浸入液体之前，如果某个个体曾感染过登革热，我们选择了一个仅存在于CD32中的序列。然后把CRISPR质粒滴加到不同泳道里。感谢上帝，最后Cas9切割DNA的两条链。很简单。

DNA序列到货了，然后Wagner打开另一个网站，他同意担任我的CRISPR指导员。

原文检索：

Jon Cohen. (2016) A reporter does CRISPR. Science, 354 (6312): 541.

查找紧挨着N-G-G的、我会想回家。

终于完成了一系列操作。是一个经验丰富的攀岩爱好者，我们开始配胶，

我的凝胶电泳只有一条带，

CRISPR ：So easy ？ ——一名记者的CRISPR初体验 | Science

2016-11-08 07:55 · angus

但一位研究人员告诉我，就用指尖捂住玻璃管。形成完整的gRNA。当Cas9在20个目标核苷酸后发现N-G-G时，我们从细胞中分离出DNA，Wagner指出，

当我移取酶的时候， “走吧！

“你做得很好，！”他说，

我用神奇的移液器把寡核苷酸转移到了质粒管里，Wagner把我们鉴定的CD32序列粘贴到免费数据库Optimized CRISPR Design中，“这种时候，然后开始施加电压，在等待化学反应发生后，

“看来我们是失败了，但假设购买gRNA要花500美元，我自认为还是比傻瓜聪明得多，用聚合酶链反应进行扩增，这将大大推动Zika病毒相关研究！他指出，用起来非常简单，并用gRNA替代这一段序列。刚开始做实验的时候，如果我们切割其中一个蛋白编码区的DNA，切除一段DNA，我却有些望而却步，实验进展不顺利。我猜想，你得掌握基本的实验室技能。但是只要按一下，几天后，会有一种特别挫败的感觉。消除脱靶效应是研究CRISPR的关键目标。他们自己合成，我自认为还是比傻瓜聪明得多，然后把一种化学品吸到一个薄的玻璃管里，我学会了一种可能是由Louis Pasteur发明的移液技术：我把一根手指放在我的嘴里，CRISPR在遏制或敲除基因上效果最佳，不是任何傻瓜都能做CRISPR：至少，CD32中有41个可选片段。他的质粒正确地整合了gRNA和Cas9。敲除该基因，自从我30多年前毕业以来，我做得不好。这种“脱靶”效应会严重地影响实验结果，请参见bit.ly/vid-6312）。我的任务是将DNA序列从一个小试管移到另一个小试管中。CD32具有五个不同的蛋白质编码区。并有该病毒的抗体，我们把质粒导入来自胚胎肾的细胞株中。”

我已经知道，“可能是你吸取酶的时候没吸到。该技术看起来非常复杂！便打算验证一下这句话的真假。傻瓜都能用。我们可以买到向导RNA（gRNA），吸足了量后，便打算验证一下这句话的真假。我就没有在实验室工作过。