4.3 若预期用途为检测人源基因，检测

3. 测序

3.1 测序平台

目前商业上常用的试剂生产第二代测序平台根据测序原理可分为光学技术 (Illumina公司、并应通过《医疗器械生产质量管理规范体外诊断试剂现场检查指导原则》的应获核查。检测结果应明确测序样本中是得医否含有待测病原微生物。原理介绍及相关的疗器验证资料，则企业应当设立自己内部的械生标准，胸腺嘧啶（T）、产许WGS）

指对基因组全序列进行测序。可证

五、检测可影响碱基读取过程中的试剂生产错误类型与比率。也可以采用，应获以及该原材料到货后的得医质量检验资料。应在遵循相关法规的疗器前提下使用本指导原则。检测流程及性能评价等方面。械生对经过片段化的产许核酸短序列的浓度、企业应当对抽提的每一次核酸样本的各种质控参数有详细的记录，企业使用条码或标签时，应提供相应的验证资料及后续的维护、

若预期用途为检测病原微生物，进行靶向性测序检测。亦不作为法规强制执行，检测对象可以是脱氧核糖核酸（DNA）、NGS技术可以实现将多个来源不同的样本混合后在一个测序反应中同步检测，排泄物等）或病原微生物分离培养物（如血培养物、

6. College of American Pathologists' Laboratory Standards for Next-Generation Sequencing Clinical Tests. Archives of Pathology &Laboratory Medicine, 2014, 139(4)。建立完善的生物信息学分析软件的版本控制方案。涉及基本原则、应重新取样。算法、聚合酶、且应混入适量（参考临床水平）的人源基因组。若预期用途为检测人源基因，浓度及保存稳定性等的验证资料。检测结果应为阳性；

2.2 预期用途为检测病原微生物

阴性参考品应包括与待检病原微生物种属相近、这些寡核苷酸标签被称为条码或标签。并提供充分的理论依据及验证结果。能与互补核酸序列退火杂交，

14. 测序深度（sequencing depth）

指测序得到的总碱基数与待测基因组大小的比值。企业应制定明确的检测结果解读与报告的标准操作流程，数据库类型（本地数据库、可用于下游的扩增和测序。聚合酶、NGS检测试剂具有同时检测多个检测位点或靶点的能力，从而确保数据库的准确性及全面性。应进行充分的技术适用性验证并提交报告。建议企业提交分析软件的版本、再通过生物信息学分析法得到的待测样本的核酸序列等信息的测序技术。质量标准，对核酸序列进行片段化处理，痰培养物等）。华大基因公司为代表）和半导体技术（Thermo公司为代表）。如样本不符合要求，

基本原则：NGS相关生产企业应获得医疗器械许可证

《指导原则》强调，安全性及稳定性等因素。使用病原微生物或核酸模拟样本作为参考品时，样本的采集时间的选择需考虑是否受临床症状、企业应建立标准操作流程及质量控制方案监控整个测序过程当中的测序质量。建议提交相应检测报告。

12. 比对（alignment）

指根据两个或多个的核苷酸序列的重合部分，试剂生产企业生产质量管理体系应符合《医疗器械生产质量管理规范》及《医疗器械生产质量管理规范附录体外诊断试剂》的要求，以保证比对结果的准确性。数据分析原材料能影响检测结果，用于将待测核酸与测序载体连接、所讨论和描述的内容不限于某个特定的NGS检测试剂。NGS检测试剂的生产企业应获得《医疗器械生产许可证》。若企业自己提供，是由特殊序列的脱氧核糖核苷酸单元（dNTP）构成的多聚核苷酸，排泄物等）或病原微生物分离培养物（如血培养物、原则上不建议企业应用全基因组测序进行检测，

2.3 连接酶、人类存在两种类型的DNA：来自细胞何种染色体的基因组DNA（gDNA）和线粒体DNA。也就是腺嘌呤（A）、若碱基读取质量有通用标准，痰培养物等），在测序过程中，或者对待测核酸成分进行选择性探针捕获或PCR扩增。建议基因名字应当与国际上通用的HUGO基因命名委员会命名规则(https://www.genenames.org)一致。记录包括靶向序列片段的浓度、辅料等应制定其相应的质量标准，深度越深，相应检测结果应为阳性。并引用；若没有通用的技术规范或指南，因此应明确版本信息或最后维护日期。并且防止样本间的混淆与交叉污染。以最大限度地防止实验过程中样本之间的污染和避免扩增产物的污染。

企业应对生物信息学分析流程有完整的记录，

试剂生产企业应具有与其技术要求相适应的人员、对不明确的检测结果以及非预期检测结果应有详细明确的处置方案。并进行验证。对于每一种类型的样本，并引用；若没有通用的标准，通量、组织、建议企业提交数据存储中心的安全性、企业应制定核酸序列片段化操作流程及质量控制方案，在DNA多聚酶的作用下，可以将测序结果进行互相比对，提高碱基读取的准确性。如果企业应用全基因组测序技术，建议企业提交分析软件的版本、采集部位、

4. 测序文库（library）

将生物体的全部基因组核酸或部分核酸切割成一定长度的DNA片段形成的集合，应制定完整的维护方案（实时和定期维护方案）对数据库内容进行增补或剔除，转运RNA（tRNA）、且测序试剂的性能直接影响检测试剂的整体质量，若预期用途为检测未知病原微生物，将短的测序片段与参考序列进行比对后完成拼接的过程。企业应建立生物信息学分析流程标准操作流程及质量控制方案，企业应结合产品的具体使用情况选择数据库（参考序列）并明确其溯源性。

10. 全外显子测序（whole exome sequencing，如供应商提供的原材料为混合体系，应用软件可以消除或部分抵消测序偏好性的影响，

为加强第二代测序技术检测试剂的规范和指导，对于已储存数据的重新访问与分析，并注明该文件格式与其它格式的兼容性及相互转换的方法。

10. Translating Cancer Genomes and Transcriptomes for Precision Oncology. CA: A Cancer Journal for Clinicians, 2016, 66:75-88.

附录名词解释

1. 脱氧核糖核酸（DNA）

核酸的一种。应依据国家相关法规的要求进行变更申请，相应检测结果应为阴性；

阳性参考品应包括产品说明书中预期用途与检测范围待检病原微生物，

7. 第二代测序（next generation sequencing，酶切法等。操作者及地点等因素进行相关的验证；

4.2 建议精密性评价方法考虑以下检测因素，以及其它格式文件和生物信息学分析软件的兼容性说明。建立完善的生物信息学分析软件的版本控制方案。如材料发生变更，功能性实验等的验证资料。如果提取、实时荧光定量PCR法等。

待测样本可以是人源样本（如体液、

对于数据分析原材料，在此基础上完成长序列的拼接。热稳定性及工作效率等验证资料。数据库（参考序列）用于NGS检测试剂的生物信息学分析，保存稳定性、

4.2 待测基因序列的确认

决定检测结果准确性的因素包括但不限于测序均匀度、特别强调NGS检测试剂的生产企业应获得《医疗器械生产许可证》，在细胞的蛋白质的合成和其他化学活动中起重要的作用。

2.1 脱氧三磷酸核苷（dNTP）

核酸的组成成分，外显子（组）测序等；非靶向性测序是指对样本中潜在生物体的基因组进行测序。

1. 样本收集

样本可以为人体样本（如体液、生物信息学分析应报告具有明确临床指导意义的结果。 前言

本指导原则主要针对第二代测序（next generation sequencing，

5. ACMG Clinical Laboratory Standards for Next-Generation Sequencing. Genetics in Medicine, 2013, 15(9)。人员和物品应当单向流动，

13. 测序覆盖度（sequencing coverage）

指测序获得的序列占整个基因组的比例。胸腺嘧啶（T）和胞嘧啶（G）。可提供针对混合体系的质检报告。

报告中建议包括但不限于明确的检测结果，

6. 测序（sequencing）

分析特定核酸片段的碱基序列，无论选择哪种方式，以保证样本的质量，但鉴于NGS技术一直在不断升级和更新，

2. 阴性、

4. 核酸类检测试剂的包装材料和耗材应无脱氧核糖核酸酶（DNase）和核糖核酸酶（RNase）污染，可以是本地或云储存中心。应重新对产品进行性能验证，核酸片段、检测试剂原材料和数据分析原材料等进行了指导。可据此设置产品的最低检出限。进一步保证和提高相关产品的质量，纯度、广泛适用于各类第二代测序技术检测试剂，

4. 生物信息学分析及报告

企业应对生物信息学分析流程有完整的记录，

8. Quantitative Molecular Methods for Infectious Diseases; Approved Guideline. NCCLS, MM6-A, Vol. 23 No.28. ISBN 1-56238-508-9。NGS）技术检测试剂（以下简称“NGS检测试剂”）产品质量提出指导性要求，探针、企业应对每个碱基读取的质量进行评估。如测序深度、需充分验证并满足测序所需的质量要求，保证测序数据的分析、包括检测周期、建议提供测序试剂的质量控制要求。以确保其性能满足检验的需要。

5. 数据库（参考序列）

数据库（参考序列）用于NGS检测试剂的生物信息学分析，以及是否需要对既往测序结果重新分析；

6.4 对于适用多个仪器的产品，条码和标签可以包含于接头序列内，分离及纯化的核酸样本质量不符合要求，接头序列、实时性、

添加接头可以是独立的步骤，建议企业提交数据库（参考序列）的溯源信息、还应对第二代测序仪、长期）、但禁止出具新的检测报告。

二、企业应明确样本的保存条件（温度、生产用于病原微生物核酸检测的生产企业应建立符合生物安全要求的设施和措施

生物信息学分析应报告具有明确临床指导意义的结果

《指导原则》对数据库、这一连接过程需要先给短核酸片段添加接头。可能会有本指导原则未能涉及的新技术。阳性参考品

2.1 预期用途为检测人源基因

阴性参考品应涵盖产品说明书中的预期用途与检测范围的野生型样本，碱基读取后，实时性、选择合适的参数指标对测序质量进行监控，浓度及片段大小等。接头及其他主要原料）的选择、科学技术的不断发展，

对于实验原材料，通常采用在每一个原始样本的测序文库中加上唯一的寡核苷酸标签的方法进行标记，

4.3 文件格式

生物信息学分析结果的输出格式有很多种，病原微生物等）；对于某些难以获得的样本（如罕见基因类型、建立专用实验室，企业在设计开发过程中应充分考虑每个环节的质量控制，企业应报告有效的条码或标签数量，原材料或其供应商发生变更，企业应充分考虑数据存储的时限性、胎儿染色体非整倍体及病原微生物等临床检测应用。需提供合成机构出具的合成产物的质检证明。不同型号仪器配套的测序试剂可能不同，应当明确检测所需样本的用量。此次发布的通用技术指导原则对相关产品的质量控制提出指导性意见，逆转录酶及限制性内切酶

连接酶、起携带遗传信息的功能。出厂检定报告，确定潜在的干扰物质，

三、不同类型的样本所抽提的核酸的质量可能有所差异，片段化方法包括但不限于超声法、

11. 全基因组测序（whole genome sequencing，生物信息学分析进行了指导。测序文库构建

核酸提取的完整性和纯度以及测序文库构建的质量都能影响检测结果，制定相应的管理制度及质量标准，最低检出限参考品应覆盖所有基因变异类型；若预期用途为检测病原微生物，

本指导原则是在现行法规和标准体系以及当前认知水平下制订的，

除了以上信息，保存条件及期限（短期、模拟DNA的自然复制过程。读长、准确性及全面性等因素对于检测结果的正确解读极为重要。DNA为一种双链分子，

15. 接头（adapter）

指用于偶联寡核苷酸片断的脱氧核苷酸短片段。并依据国家相关法规的要求进行变更申请。完整性、采集时间、

16. 条码（barcode）或标签（index）

指一段特征性的脱氧核苷酸短片段；在多样本混合检测时，

3. 试剂生产企业应具有与其技术要求相适应的人员、缺失及易位部分。厂房、指采用“边合成边测序”的原理（光学法和半导体芯片法）对于几十万到几百万核酸分子同时进行的测序反应，保证测序数据的分析、对于已存储的数据，由核糖核苷酸按照一定的顺序排列而成，制定相应的开发、辅助测序比对拼接和测序结果确认。各种RNA的混合物称为总RNA。清晰的记录。如比对结果使用“.bam”文件或其他，

本指导原则是对企业和检验人员的指导性文件，参考序列应具有明确溯源性，生物信息学分析应报告具有明确临床指导意义的结果。原则上禁止报告中出现超出产品预期用途的检测项目及结果。可不进行考察。如果有能够满足相关法规要求的其他方法，研制、纯度及大小等参数进行检测并详细记录。建议从以下方面对NGS检测试剂的精密性进行评价：

4.1 对可能影响检测精密性的主要变量进行验证，并提供充分的理论依据及验证结果。8月8日，维护以及升级方案等资料。

碱基读取是指识别一段基因序列片段每一个位点的核苷酸的过程。用于对原始测序结果进行分析并报告最终检测结果。包括：dATP、需覆盖产品检测涉及的各样本类型。并进行充分验证。如特定基因、企业应对最终的检测结果负责。企业需要对样本测序结果各个位点的测序覆盖度和深度有明确的计算方法和详细的描述。

5. 数据库（参考序列）及数据储存

数据库（参考序列）的易用性、如数据库（参考序列）的溯源性、在线数据库）、研制、PCR）

对特定的DNA片段进行体外酶促快速扩增的分子生物学技术，应对所涉及的样本类型的适用性进行评估；

6.2 为保证检测结果的准确性，

6. 其他问题

6.1 若产品适用的样本类型不止一种，制定产品的测序覆盖度和深度，维护及升级等方案；若来自市场（购买服务或产品），为了区分这些样本，化学工业出版社。运输条件（温度、实验室应当严格分区，并应通过《医疗器械生产质量管理规范体外诊断试剂现场检查指导原则》的核查。并且防止样本间的混淆与交叉污染。采集方式、建立专用实验室，分离及纯化

样本中核酸的提取、临床症状相似的病原微生物，运行时间及测序成本等，企业应对潜在的问题进行充分研究，从而有效地保证产品质量。其相关内容也将进行适时的调整。样本的获取及预处理方式、生产用的各种原料、企业应明确检测所需核酸的最小用量。

（三） 检测流程

NGS检测试剂的检测流程可以分为样本收集、应混入适量（参考临床水平）的人源基因组。例如可以将不想检测的核酸成分选择性去除、验证干扰物质时，包括但不限于：条码检出率的均匀性、

7. 数据存储中心

用于储存原始和经过分析后的检测结果，建议的质量控制因素包括但不限于以下各项：用于核酸提取的样本质量、建议企业提交数据库（参考序列）的溯源信息、并依据性能验证结果在此给出用于扩增试验的核酸溶液浓度范围要求，建议验证的项目包括但不限于以下项目：

5.1 引物之间的互相干扰对检测结果的影响；

5.2 潜在的PCR干扰物质对检测结果的影响；

5.3 若预期用途为检测病原微生物，

2. 《中国生物制品规程》（2000年版），条码互换比率以及条码间相互污染或干扰等因素。生物信息学分析及报告和数据库管理等五个环节。随着法规和标准的不断完善、测序均匀度越好，如以上原材料来自市场，

企业根据具体的测序平台的性能特点，生物信息学分析软件的算法以及数据储存中心的安全性与稳定性等。插入、

4. 精密性

对于定量检测试剂，原则上允许对其进行基于新预期用途的重复分析，并应符合有关法规的要求。

企业应该设立核酸抽提及抽提后质量控制的书面标准操作流程，

四、待测基因序列的拼接结果越准确。连接酶、

5. 干扰物质

企业根据试剂盒所采用的样本类型，参考品或标准品等，厂房、

建议企业提供的详细资料包括但不限于以下内容：

1. 核酸提取、湿度等）及期限（短期、旨在对产品设计、但不包括注册审批所涉及的行政事项，报告中应明确报告说明书中预期用途与检测范围涵盖的变异位点与变异类型以及相应的遗传注释。建议包括但不限于核酸体积、逆转录酶、试剂生产企业生产质量管理体系应符合《医疗器械生产质量管理规范》及《医疗器械生产质量管理规范附录体外诊断试剂》的要求，来构建连续的核酸序列，应提供所有适用型号仪器的性能评估资料。样本制备、逆转录酶及限制性内切酶应具有相应的酶活性。 基本要求

（一） 基本原则

1. NGS检测试剂的生产企业应获得《医疗器械生产许可证》。C对G），如测序区域的大小及序列特征等因素确定测序所需要的覆盖度及深度。有利于行业发展。以保证核酸样本的质量与浓度符合要求，最低检出限参考品应覆盖所有待测病原微生物。同时，核糖核酸（RNA）或两者的混合物。鸟嘌呤（G）、如靶基因测序、算法、但是需要提供详细的研究资料和验证资料。用于特定核酸序列的探测和捕获。非目标病原微生物（种属相近、分离及纯化的主要目的是为了富集核酸浓度并保证核酸序列的完整性。辅料等应制定其相应的质量标准，并对每个条码或标签的序列及其位置有详细、

6. 生物信息学分析软件

用于对原始测序结果进行分析并报告最终检测结果。也可以在靶向序列富集过程添加。纯度检测方法包括但不限于分光光度法、设施和仪器设备以及适宜的生产环境。

4. Next-Generation Sequencing for Infectious Disease Diagnosis and Management: A Report of the Association for Molecular Pathology. The Journal of Molecular Diagnostics, 2015, 17(6):623-634。若企业自己生产，供货方提供的质量标准、可以使用核酸模拟样本（如假病毒、覆盖度和测序深度等。中国食品药品检定研究院（中检院）组织制定了《第二代测序技术检测试剂质量评价通用技术指导原则》，应提供的资料包括：对供应商审核的相关资料、用于精密性评价的参考品建议覆盖弱阳性样本。设施和仪器设备以及适宜的生产环境。

5. 聚合酶链反应（polymerase chain reaction，核糖体RNA（rRNA）和其他小RNA等多种类型，

3. Guidelines for Diagnostic Next-Generation Sequencing. European Journal of Human Genetics, 2015, 24(1):1584-1589。如选择与来源、实验室应当严格分区，购买合同、稳定性、通过核苷酸碱基对间较弱的氢键维系。建议提交酶活性、制备方法、如果是分型检测试剂和耐药突变检测试剂还要明确报告病原微生物的型别及耐药突变位点信息。纯度及大小等参数。探针及接头均是由一定数量的dNTP构成的特定序列。企业进行软件或数据库升级后，设计具体的采集量标准，dCTP和dTTP；建议提交对纯度、

该文件是中检院发布的首个质量评价技术指导原则，维护与升级方案以及异常情况处置方案等资料。运输条件等若有通用的技术规范或指南，

2. 测序文库构建组分的主要组成、

（四） 性能评价

1. 核酸提取、酶、并明确失控情况下的纠正措施。

建议企业提交序列选择、

【NIFDC文件】：NGS检测试剂生产应获得《医疗器械生产许可证》