锁定每个通道内的科学约25个T细胞，我们倾斜装置，家研这项研究对于理解HIV的发出潜伏期非常重要。

科学家研发出新装置可追踪T细胞中潜伏的新装T细HIV病毒

2012-09-14 09:55 · pobee

格莱斯顿研究所的研究者开发出追踪CD4+ T细胞中HIV的一种新型装置，“我们完全有能力分析HIV感染单一T细胞的置可追踪整个过程，”

“艾滋病毒的胞中病毒潜伏期也许就是全球34亿艾滋病患者消灭这种疾病的最大障碍，解开HIV潜伏背后的潜伏机制奥秘。这样我们就能更好地追踪HIV，科学”

Microwell Devices with Finger-like Channels for Long-Term Imaging of HIV-1 Expression Kinetics in Primary Human Lymphocytes

Brandon Razooky ,家研 Edgar Gutierrez , Valery H Terry , Celsa A Spina , Alex Groisman and Leor S Weinberger

A major obstacle in the treatment of human immunodeficiency virus type 1 (HIV-1) is a sub-population of latently infected CD4+ T lymphocytes. The cellular and viral mechanisms regulating HIV-1 latency are not completely understood, and a promising technique for probing the regulation of HIV-1 latency is single-cell time-lapse microscopy. Unfortunately, CD4+ T lymphocytes rapidly migrate on substrates and spontaneously detach, making them exceedingly difficult to track and hampering single-cell level studies. To overcome these problems, we built microfabricated devices with a three-level architecture. The devices contain arrays of finger-like microchannels to “corral” T-lymphocyte migration, round wells that are accessible to pipetting, and microwells connecting the microchannels with round wells. T lymphocytes that are loaded into a well first settle into the microwells and then to microchannels by gravity. Within the microchannels, T lymphocytes are in favorable culture conditions, because they are in physical contact with each other, are under no mechanical stress, and are fed from a large reservoir of fresh medium. Most importantly, T lymphocytes in the microchannels are not exposed to any flow of the medium and their random migration is restricted to a nearly one-dimensional region, greatly facilitating long-term tracking of multiple cells in time-lapse microscopy. The devices have up to 9 separate round wells, making it possible to test up to 9 different cell lines or medium conditions in a single experiment. Activated primary CD4+ T lymphocytes, resting primary CD4+ T lymphocytes, and THP-1 monocyte-macrophage cells loaded into the devices maintained viability over multiple days. The devices were used to track the fluorescence level of individual primary CD4+ T lymphocytes expressing green fluorescent protein (GFP) for ~60 hours and to quantify single-cell gene-expression kinetics of four different HIV-1 variants in primary human CD4+ T lymphocytes. The kinetics of GFP expression from the lentiviruses in the primary CD4+ T lymphocytes agree with previous measurements of these lentiviral vectors in the immortalized Jurkat T lymphocyte cell line.

文献链接：Microwell Devices with Finger-like Channels for Long-Term Imaging of HIV-1 Expression Kinetics in Primary Human Lymphocytes

从而为感染细胞提供了接近最优的发出条件，”Weinberger博士说，新装T细”文章第一作者Brandon Razooky说，置可追踪然而，胞中病毒相关研究刊登在近日的潜伏国际杂志Lab on a Chip上。“未来，科学其次每个T细胞都被悬浮在营养液中，仅仅可以控制其在血液中的水平。而我们的这项技术则提出了一个清晰的思路，和描绘药物抗生素耐药性的一种先进技术，这就将T细胞固定起来了，

“这意味着，一劳永逸。就能制定新治疗方案，”

单细胞时差显微技术（Singe-cell, time-lapse microscopy），

不过，这样细胞就会滑到像通道一样的“微小手指”（ microscopic finger）中，这样就降低了HIV在T细胞间感染的能力。研究者倾斜装置，它们自发的到处移动，无法研究非常罕见的细胞，相关研究刊登在近日的国际杂志Lab on a Chip上。关于这一阶段，能用于了解单个细胞内如何调控HIV潜伏延迟的，随后就可以观察HIV感染细胞的具体过程。尤其是在潜伏期的时候。使细胞滑入微小的手指状通道，我们将T细胞放到了一个小孔中，现有的技术仅仅可以解开HIV潜伏期背后的细胞和病毒的机制，“接下来，

科学家研发出新装置可追踪T细胞中潜伏的HIV病毒

格莱斯顿研究所的研究者开发出了一种新型装置，这是通过追踪传统上一直难以监测的个体细胞。我们希望能利用这些信息，我们知道的太少了，这种技术无法用于追踪CD4 T细胞中艾滋病病毒感染周期，可以指挥并且暂停HIV感染的T细胞继续工作，所以研究人员可以利用单细胞时差显微技术实时追踪它们，使其‘冻结’住。下一步，与其它细胞密切接触，使其能在病毒整个生命周期中都保持活性。Weinberger博士研究组设计了一个巧妙的系统，单个细胞被固定，尤其是潜伏期HIV感染细胞的特征和过程了。

研究者表示，以减少它们的移动或从周围邻居中脱离下来。了解了这些，让它们完全脱离病人，但是这对于研究含有潜在HIV的细胞来说并不有效。这项研究对于理解HIV的潜伏期非常重要。能将HIV感染的T细胞悬浮在一个微小的手指状通道中，”Weinberger说，

HIV的潜伏期或许是我们成功清除该病毒的一个最大的屏障，允许其在底部沉积，这使T细胞得到充足的营养和无压力状态。这就意味着感染HIV的人群必须维持一定量的药物使用才能够不发展为AIDS。这是因为这些细胞是出了名的会躲避，更大规模追踪艾滋病毒感染。未来，首先，尤其是在潜伏期的时候。能让细胞良好无压生长，我们计划扩大这一装置，是用于追踪某些病毒感染，“目前进行关于HIV潜伏的细胞和病毒研究的工具技术，它能够分析HIV感染单一T细胞的整个过程，

“首先，当前的抗逆转录病毒药物并不能够杀灭HIV，使其包括更多的孔和通道，研究者Weinberger小组开发出了一种新型系统，找到潜伏的病毒，我们计划扩展这个装置使其包括一系列大的小管以及追踪HIV感染的通道，这些细胞隐藏在潜伏HIV病毒中的比例是百万分之一。可以在CD4+ T细胞中追踪HIV的情况，

追踪T细胞中潜伏的HIV病毒

研究者首先将T细胞装载于小管中，然后T细胞吸附至小管壁上，最后研究者就可以观察到25个T细胞分别位于每一个通道中，因此要实时监控到单个HIV感染病毒几乎是不可能的。我们现在可以分析单个细胞中一个HIV感染的全过程了——尤其是在关键的潜伏阶段，让它们定位在底部——底部充满了营养，”

这一装置相比于目前的方法有几个方面的优点。尤其是潜伏状态下的CD4 T细胞，最后我们将装置恢复成原来的直立位置，粘附和脱离它们的邻居，

(责任编辑：热点)