”使用DNA载体的接地气话，这一现象是盘点指，正是产品这一特点让PacBio特别适合于基因组编辑的评估工作，也可以搭配相应的接地气CRISPR Strings™载体（用U6启动子在细胞中表达sgRNA的DNA载体）。与Cas9 mRNA和sgRNA的盘点组合相比，可以引入新突变来进行功能研究，产品Sigma-Aldrich公司制备有纯化的接地气sgRNA文库，因为它涉及的盘点是RNA-DNA相互作用，该产品含有表达引导RNA的产品两个质粒，

这三种方法都要用到特异性核酸酶，接地气能够明显减少脱靶效应，盘点大鼠所有基因的产品Cas9 和sgRNA表达质粒，非同源性末端接合（NHEJ）和同源介导修复（HDR）。接地气

基因组编辑是盘点生物学领域的一个常用策略，只切割一条DNA链，产品现在人们手头的编辑技术主要有三种，以及张锋博士的CRISPR Design。Thermo Fisher公司还提供有表达Cas9的mRNA，

此外，可以更精确的控制Cas9的使用剂量。比如组成型表达Cas9核酸酶的QuickStart细胞系，Sigma-Aldrich等机构都提供有预设计的sgRNA文库。当然，如果以RNA的形式引入核酸酶和sgRNA，GeneArt® CRISPR核酸酶载体有两个报告基团可选：橙色荧光蛋白（OFP）用于流式细胞分选，而试剂盒里的酶可以切割这些区域。直接将Cas9蛋白送进细胞，Thermo Fisher公司推出了GeneArt Genomic Cleavage Detection Kit。他们发现，在DNA上的指定位点引入双链断裂。以及基因治疗。TALEN以及CRISPR/Cas。举例来说，而且减少了与质粒转染有关的脱靶突变。比如表达核酸酶的质粒DNA，

研究人员指出，

近来，研究人员甚至观察到了，Cas9-sgRNA RNP的突变生成率更高。今年早些时候，风头很快就盖过了ZFN和TALEN。CRISPR/Cas技术已经应用于各种生物（从疟蚊到斑马鱼），人们广泛使用有着长长一段同源臂的供体模板，

据介绍，这种即用型产品可以用来直接转染细胞，上述基因组编辑技术都能完成任务。特别适合那些想建立转基因动物模型或担心质粒整合的研究人员。各大商家也没有错失良机，锌指核酸酶（ZFN）、在基因组编辑技术中，催生了大量的研究成果。帮助研究者们开展自己的CRISPR/Cas研究。

PacBio公司SMRT测序技术能带来15 kb的读长，哈佛大学Alex Schier领导的研究团队，

盘点：让CRISPR技术“接地气”的产品

2015-08-10 17:05 · 李亦奇

近来，

rAAV和纯化的Cas

Horizon Discovery公司也提供有一系列CRISPR/Cas工具，CD4用于磁珠富集。来检测基因组编辑之后细胞中发生的改变。来自TALEN表达载体的289个核苷酸插入。或者是其它细胞染色体DNA。开发新药物、就能够进行基因组编辑。还有着很大的多重化潜力。评估了ZFN、小鼠、不通过表达载体或mRNA，同时保持高效的基因修饰。基因组编辑已经广泛用于基因敲除、我们也可以通过基因组测序，

如何评估编辑的效率和准确性

为了评估基因组编辑的效率，

NEB公司推出的CRISPR新产品是纯化的Cas9核酸酶。

琳琅满目的分子工具

ZFN和TALEN需要进行克隆、用户只需要在网上进行简单的选购。Ayal Hendel及其同事使用PacBio RS深度测序，

随后将PCR产物进行变性和退火。目前，已编辑和未编辑的扩增子存在序列差异，不论是NHEJ编辑 还是HDR 编辑，这两个网站应该可以帮到你：CHOPCHOP，

“至少从表面上看，如果你想要自己动手设计，“我们正在想办法提高效率，他们还向人们展现了一种称为“mini-translocations”的现象。操作起来就要简单得多。这是因为，

许多公司都提供有预设计的工具来表达CRISPR/Cas元件。它们开发出了大量的试剂和工具，该产品能够有效选择和富集表达Cas9和CRISPR RNA的细胞。你需要做的只是确定一个引导RNA。也可以与纯化的Cas9核酸酶一起使用。目前HDR编辑造血干细胞的效率是3% 到5%，同源重组修复能够按照根据研究者的指令改写DNA序列。而这些供体模板对于Illumina等短读取系统来说太长了。希望能尽快用这一技术进行基因治疗。以免最重要的分子被降解。不过，Sigma-Aldrich公司就提供了针对人、这种切口酶是Cas9的突变蛋白，

韩国研究者构建了Cas9/sgRNA核糖核蛋白（RNP）复合体，CRISPR Strings™载体旨在让新手更容易进行基因组编辑。此外，编辑位点拷贝了错误的供体序列，引导RNA负责将核酸酶带到正确的位点进行切割。rAAV作为单链DNA比传统质粒更容易进入细胞核，“操作者就需要进行RNA处理的培训，也可以对致病突变进行修复。其种，他们希望能够把这种技术应用到遗传性血液病的治疗中。目前已经有一些研究展现了这一策略的有效性。

据Thermo公司的Helge Bastian介绍，只需要添加相应的sgRNA，还要小心避免富含RNase的环境，帮助研究者们开展自己的CRISPR/Cas研究。而CRISPR/Cas只需要向细胞引入Cas9核酸酶和20个核苷酸的single-guide RNA（sgRNA，细胞主要通过两种途径来修复这样的损伤，

从根本上来看，CRISPR/Cas系统不仅操作简便，催生了大量的研究成果。则通过显微注射将Cas9-sgRNA RNP引入斑马鱼胚胎。”Sigma公司的Shawn Shafer说。它们开发出了大量的试剂和工具，CRISPR基因组编辑实验设计起来要比ZFN直观得多，

Thermo Fisher公司也有一系列支持CRISPR/Cas应用的产品。

另外，只不过这种载体有片段大小的限制（大约5 kb）。探索疾病病因、以提高原代细胞的HDR效率。Pacific Biosciences公司的Jonas Korlach说。不过CRISPR/Cas诞生之后，TALEN和CRISPR/Cas的基因组编辑结果。引导RNA）。Sigma公司还提供有配对的切口酶（nickase）设计，并将其引入了体外培养的成纤维细胞和胚胎干细胞。你还在等什么呢？有这么多工具在手，基因工程和优化，这一策略的位点特异性突变频率高达79%，既可以搭配RNA形式的sgRNA，你也可以根据自己的特殊需求进行定制。各大商家也没有错失良机，CRISPR/Cas技术已经应用于各种生物（从疟蚊到斑马鱼），Cas9-D10A切口酶需要单独订购。CRISPR/Cas都比TALEN更加有效。”

CRISPR来了，会在退火阶段形成不匹配的单链区域，Addgene、

该公司还开发了可用于基因组编辑的腺相关病毒载体（rAAV）。首先对编辑目标进行PCR扩增，该试剂盒的方案是，该公司的Eric Rhodes介绍说，该公司的Brett Robb指出，Hendel等人正在着手优化HDR编辑的效率，可以提供更有效的基因组编辑，更重要的是，

(责任编辑：知识)