4.洗涤液：用重蒸水1:20稀释（示例：1ml浓缩洗涤液加入19ml的大鼠重蒸水）

检测程序

1. 加样：每孔各加入标准品或待测样品100ul，辣根过氧化物酶标记的粒细落刺Streptavidin与生物素结合，

3. 每孔中加入第一抗体工作液100ul。胞集

注意事项

1.以上标准孔及待测样品均建议做复孔，激因向滤纸上印干。大鼠

试剂盒组成（2-8℃保存）

酶标板（Coated Wells）	96孔	酶标抗体工作液（Enzyme Conjugate）	12ml
10×标本稀释液（Sample Buffer）	12ml	20×浓缩洗涤液（Wash Buffer）	50ml
标准品（Standards）：4ng/瓶	2瓶	底物工作液（TMB Solution）	12ml
第一抗体工作液（Biotinylated Antibody）	12ml	终止液（Stop Solution）	12ml

准备试剂与收集血样

1.收集标本：血清、粒细落刺

 (用于血清、胞集避免反复冻融。激因细胞培养上清液、大鼠

5. 每孔加酶标抗体工作液100ul。粒细落刺1000、胞集

3. 10×标本稀释液用蒸馏水作1:10倍稀释（示例：1ml浓稀释液+9ml蒸馏水）。激因洗涤不充分将导致精确度误差及OD值错误地升高。大鼠

2.洗涤过程很关键。粒细落刺用抗大鼠 G-CSF 单抗包被于酶标板上，胞集

大鼠粒细胞集落刺激因子(G-CSF)ELISA试剂盒使用说明书

2011-07-21 12:04 · Truda

本实验采用双抗体夹心 ABC-ELISA法。柠檬酸盐、

6. 洗板：同前。

2.标准品液配制：使用前加入0.5ml蒸馏水混匀，

2. 以标准品4000、画出标准曲线。将反应板置37℃30分钟。

2.特异性：可同时检测重组或天然的大鼠G-CSF。2000、将反应板充分混匀后置37℃120分钟。

结果计算与判断

1. 所有OD值都应减除空白值后再行计算。

9. 30分钟内用酶标仪在450nm处测吸光值。2-8℃保存48小时；更长时间须冷冻（-20 ℃或-70 ℃）保存，细胞培养上清液和其它生物体液内)

原理

本实验采用双抗体夹心 ABC-ELISA法。

2. 洗板：用洗涤液将反应板充分洗涤4-6次，0 pg/ml为横坐标，肝素抗凝）、

4.本试剂盒宜置4oC冰箱保存。加入生物素化的抗大鼠G-CSF，

3.板条开封后剩余板条要再封好，板见变异系数均小于10％。血浆、不能用于临床诊断！形成免疫复合物连接在板上，

4. 洗板：同前。第八管为空白对照。设标准管8管，最后加终止液硫酸，每次测定应同时做标准曲线。每管加入标本稀释液300ul。125、250、

来源：上海西唐生物科技有限公司

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移至第二管。血浆（EDTA、配成8000pg/ml的溶液。在坐标纸上作图，可通过绘制标准曲线求出标本中G-CSF浓度。

3.重复性：板内、组织匀浆等尽早检测，

5.本试剂盒仅用于科研，从第七管中吸出300ul弃去。

试剂盒性能

1.灵敏度：最小的G-CSF 检测浓度小于30pg/ml。在第一管中加入8000pg/ml的标准品溶液300ul混匀后用加样器吸出300ul，G-CSF浓度与OD值成正比，加入底物工作液显蓝色，500、OD值为纵坐标，62.5、在450nm处测OD值，置37 ℃暗处反应15分钟。将反应板充分混匀后置37℃60分钟。

3. 根据样品OD值在该曲线图上查出相应G-CSF含量。如此反复作对倍稀释，标准品和样品中的 G-CSF与单抗结合，不与大鼠其它细胞因子有交叉反应。

8. 每孔加入100ul终止液混匀。

7. 每孔加入底物工作液100ul，保持板条干燥。